Francesco Villani » 35.Numerazione dei microrganismi aerobi mesofili totali e delle Enterobacteriaceae in vegetali di IV gamma

Numerazione Microflora totale e Enterobacteriaceae da insalate di IV gamma

Materiale occorrente per l’analisi

• Bilancia.
• Apparecchiatura e sacchetti sterili per omogeneizzazione.
• Attrezzi per la manipolazione del campione: coltelli, forbici, spatole, cucchiai, pinze, cilindri graduati, ecc., sterili.
• Pipette da 10, 1 e 0,1 ml sterili.
• Tubi per batteriologia.
• Piastre Petri sterili.
• Incubatori.
• Vortex.
• Autoclave.
• Becco Bunsen.
• pHmetro.
• Diluente sterile.
• Terreni nutritivi.

Microrganismi aerobi mesofili totali

Materiale occorrente:

• Seguire le procedure generali descritte negli Schemi A, B e D (Lezione 34) utilizzando come terreno nutritivo il PCA (Plate Count Agar; Lezione 27).

Operazioni:

• Preparare le diluizioni del campione fino a 10^-7.
• Seminare per inclusione (1 ml); aggiungere 15 ml di terreno nutritivo; lasciare solidificare.
• Incubare in aerobiosi a 30°C per 72 ore.
• Lettura dei risultati (Schema E). Riportare nella Scheda di rilievo.

Enterobacteriaceae

Materiale occorrente:

• Seguire le procedure generali descritte negli Schemi A, B e D (Lezione 34) utilizzando come terreno nutritivo il Violet Red Bile Glucose Agar (Lezione 27).

Operazioni:

• Seminare per inclusione (1 ml) le diluizioni da 10^-1 a 10^-5.
• Aggiungere 15 ml di terreno nutritivo; dopo solidificazione del terreno, versare un altro strato di terreno (circa 6-7 ml) al fine di assicurare condizioni anaerobiche favorevoli alla fermentazione del glucosio.
• Incubare a 37°C per 24 ore.
• Numerazione colonie tipiche: di colore rosa-rosso, circondate da un alone di colore porpora dovuto alla precipitazione dei sali biliari in ambiente acido.
• Conferma isolati: isolare 4-5 colonie su piastre di Agar nutritivo. Dopo incubazione a 35-37°C per 24 ore, sulle colonie isolate si determinerà la morfologia, la Gram-reazione, la catalasi e l’ossidasi.

Scheda di rilievo dei risultati (PARTE I)

Descrizione del campione alimentare

Scheda di rilievo dei risultati (PARTE II)

Scheda di rilievo dei risultati

Prossima lezione

Numerazione di coliformi e di Escherichia coli in carne macinata