Vincenzo De Simone » 3.Metodiche di estrazione e di analisi degli acidi nucleici

“Lettura” del DNA allo spettrofotometro

Il filmato mostra la determinazione della concentrazione di un campione di DNA effettuata mediante lettura dell’assorbimento a 260 nm con uno spettrofotometro.

Preparazione di un gel di agarosio all’1,2%

Il filmato mostra la preparazione di un gel di agarosio per la separazione elettroforetica di frammenti di DNA generati mediante PCR o digestione con enzimi di restrizione. 1.2 grammi di agarosio sono sciolti al calore in 100 ml di soluzione tampone per elettroforesi TAE (Tris/Acetato/EDTA).

Alla soluzione tiepida è aggiunto il bromuro d’etidio, ed il gel ancora liquido è versato in uno “stampo” orizzontale nel quale, su uno dei lati, un “pettine” verticale formerà una serie di piccole cavità (pozzetti).

Elettroforesi del DNA su gel di agarosio

Il campione di DNA da analizzare, sciolto in una soluzione di “caricamento” contenente glicerolo e due diversi coloranti, è depositato nei pozzetti del gel, a sua volta immerso nel tampone di corsa in una vaschetta per elettroforesi orizzontale.

L’andamento della separazione elettroforetica è evidenziato dalla migrazione dei due coloranti verso il polo positivo.

Purificazione di frammenti di DNA

E’ illustrata la procedura per la purificazione di un frammento di DNA separato mediante elettroforesi.

Estrazione di DNA plasmidico da E.coli

Il filmato illustra la procedura di estrazione di DNA plasmidico da colture di E. coli. Il “protocollo” dettagliato è riportato nelle due diapositive seguenti.