III-C) Costruzione di molecole ricombinanti in vitro
Prof. Vincenzo De Simone
Dott.ssa Luisa De Magistris
Le metilasi proteggono il DNA dagli enzimi di restrizione
Gli enzimi di restrizione “tagliano” sequenze specifiche
Modalità di taglio degli enzimi di restrizione
Un vettore di clonaggio (plasmide)
Inserimento del DNA nel plasmide
“Legatura” delle estremità coesive del DNA
Da dove prendiamo il gene GFP…
…e dove lo inseriamo !
La “digestione” con enzimi di restrizione
La purificazione dei frammenti dal gel
La reazione di ligasi
“Trasformazione” dei batteri con DNA plasmidico
Colonie positive (bianche) e negative (blu)
Amplificazione e purificazione di un plasmide
Minipreparazioni di DNA plasmidico I
Minipreparazioni di DNA plasmidico II
Analisi delle minipreparazioni di DNA
Taglio con EcoR1 e clonaggio
Taglio con EcoR1 e clonaggio
Le lezioni del Corso
Argomenti ed organizzazione del corso di Biologia Molecolare in formato e-learning
1. Composizione chimica e conformazioni degli acidi nucleici
2. Organizzazione della cromatina eucariotica
3. Metodiche di estrazione e di analisi degli acidi nucleici
4. Componenti e funzionamento della forca di replicazione
5. Controllo dell'inizio e della terminazione della replicazione
7. Ricombinazione e Riparo del DNA
8. Ricombinazione sito-specifica e trasposoni
9. Costruzione di molecole ricombinanti in vitro
10. Struttura e funzionamento dell'RNA polimerasi batterica
11. Regolazione della trascrizione nei procarioti
12. I saggi EMSA e DNAse I footprinting
13. Le tre RNA polimerasi eucariotiche ed i relativi promotori
14. Regolazione della trascrizione negli eucarioti
15. Studio dei promotori e delle unità trascrizionali eucariotiche
16. RNA catalitici e maturazione degli RNA eucariotici
17. Ribozimi ed RNA interference
18. Applicazioni pratiche dei ribozimi e dell'RNA interference
19. Le tappe della sintesi delle proteine in procarioti ed eucarioti
I materiali di supporto della lezione
Alberts B & al. Biol. Mol. della Cellula (essenziale), Zanichelli, Cap. 10
Brown TA, Genomi II, EdiSES, Cap. 4
Brown TA, Biotecnologie Molecolari, Zanichelli, Cap. 4,5,6
Lewin B Il Gene VIII, Zanichelli
Lewin B Il Gene (ed. compatta), Zanichelli, Cap. 32
Watson JD & al., Biologia Molecolare del Gene, Zanichelli, Cap. 20
Il Podcast della lezione
Le altre lezioni del corso con podcast
Argomenti ed organizzazione del corso di Biologia Molecolare in formato e-learning
1. Composizione chimica e conformazioni degli acidi nucleici
2. Organizzazione della cromatina eucariotica
3. Metodiche di estrazione e di analisi degli acidi nucleici
4. Componenti e funzionamento della forca di replicazione
5. Controllo dell'inizio e della terminazione della replicazione
7. Ricombinazione e Riparo del DNA
8. Ricombinazione sito-specifica e trasposoni
9. Costruzione di molecole ricombinanti in vitro
10. Struttura e funzionamento dell'RNA polimerasi batterica
11. Regolazione della trascrizione nei procarioti
12. I saggi EMSA e DNAse I footprinting
13. Le tre RNA polimerasi eucariotiche ed i relativi promotori
14. Regolazione della trascrizione negli eucarioti
15. Studio dei promotori e delle unità trascrizionali eucariotiche
16. RNA catalitici e maturazione degli RNA eucariotici
17. Ribozimi ed RNA interference
18. Applicazioni pratiche dei ribozimi e dell'RNA interference
19. Le tappe della sintesi delle proteine in procarioti ed eucarioti
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