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Vincenzo De Simone » 9.Costruzione di molecole ricombinanti in vitro


III-C) Costruzione di molecole ricombinanti in vitro

Prof. Vincenzo De Simone

Dott.ssa Luisa De Magistris

Le metilasi proteggono il DNA dagli enzimi di restrizione


Gli enzimi di restrizione “tagliano” sequenze specifiche


Modalità di taglio degli enzimi di restrizione


Un vettore di clonaggio (plasmide)


Inserimento del DNA nel plasmide


“Legatura” delle estremità coesive del DNA


Da dove prendiamo il gene GFP…


…e dove lo inseriamo !


La “digestione” con enzimi di restrizione


La purificazione dei frammenti dal gel


La reazione di ligasi


“Trasformazione” dei batteri con DNA plasmidico


Colonie positive (bianche) e negative (blu)


Amplificazione e purificazione di un plasmide


Minipreparazioni di DNA plasmidico I


Minipreparazioni di DNA plasmidico II


Analisi delle minipreparazioni di DNA


Taglio con EcoR1 e clonaggio

Taglio con EcoR1 e clonaggio

Taglio con EcoR1 e clonaggio


I materiali di supporto della lezione

Alberts B & al. Biol. Mol. della Cellula (essenziale), Zanichelli, Cap. 10

Brown TA, Genomi II, EdiSES, Cap. 4

Brown TA, Biotecnologie Molecolari, Zanichelli, Cap. 4,5,6

Lewin B Il Gene VIII, Zanichelli

Lewin B Il Gene (ed. compatta), Zanichelli, Cap. 32

Watson JD & al., Biologia Molecolare del Gene, Zanichelli, Cap. 20

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