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Vincenzo De Simone » 15.Studio dei promotori e delle unità trascrizionali eucariotiche


V – La Trascrizione negli eucarioti

V-C) Studio dei promotori e delle unità trascrizionali eucariotiche

Prof. Vincenzo De Simone

Dott.ssa Luisa De Magistris

Studio di un’unità trascrizionale


Il northern blotting


La RT-PCR (Reverse Transcriptase)


Studio della distribuzione di un trascritto


Identificazione del punto d’inizio della trascrizione: “S1 mapping”


Una variante: RNase protection


Identificazione del punto d’inizio della trascrizione:”primer extension”


Amplificazione della regione 5′ di un mRNA


Identificazione di sequenze di regolazione della trascrizione


Geni “reporter” per lo studio di un promotore


Espressione “stabile” o “transiente” di un gene estraneo inserito in cellule eucariotiche


Esempio di analisi funzionale di un promotore mediante delezioni progressive


Esempio di analisi funzionale di un promotore mediante mutagenesi (linker scanning)


Il saggio CAT


Il gene GFP come marcatore di espressione


Studio di un fattore trascrizionale mediante co-trasfezioni


Identificazione dei domini funzionali di un fattore trascrizionale mediante delezioni


Come si ottengono animali “transgenici”


Le piante “transgeniche”


I Potenti Mezzi della Postgenomica!


Sintesi di oligonucleotidi “in situ” (DNA chips)


Profili di espressione genica mediante microarrays a DNA


Profili di espressione genica – I


Un esperimento di microarrays


Analisi “in silico” di promotori eucariotici


Introduzione di DNA in cellule eucariotiche: trasfezione con Ca-PO4

Il filmato mostra la procedura di trasfezione di colture di cellule eucariotiche mediante coprecipitazione del DNA con Ca-PO4


I materiali di supporto della lezione

Alberts B & al. Biol. Mol. della Cellula (essenziale) Zanichelli

Brown TA Genomi II EdiSES Cap. 9

Brown TA Biotecnologie Molecolari Zanichelli Cap. 11

Lewin B Il Gene VIII Zanichelli

Lewin B Il Gene (ed. compatta) Zanichelli

Watson JD & al. Biologia Molecolare del Gene Zanichelli

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